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n 胶体金试剂 派坤生物提供含10-65纳米粒径的胶体金的试剂。这些试剂的标准配方为浓度10-12个OD单位，波长540nm。我们以粒度为10个OD单位的溶液为标准来计价,其余浓度,大小的配方可以根据客户的要求定制。 n 什么是胶体金?
胶体金是一种不具有特定结构的原子，由Gold
Chloride还原而成；不同还原剂可调控胶体金颗粒形成的大小，而不同颗粒大小的胶体金会有不同的应用。 因为具有强稳定性，胶体金标记法在80年代后期被引入到快速诊断试剂中。不同大小的胶体金都可以在特定的条件下制备出来，大小不同其用途也不一样。由于胶体金可见性和空间位阻的平衡关系，胶体金免疫层析试剂大都选用40nm的胶体金作为它们的标记物。目前生产40nm胶体金的方法都是化学还原法，将1％柠檬酸三钠加入沸腾的0.01%氯化金水溶液中就能生产出想要的胶体金溶液。虽然看似简单，但要生产出单分散的胶体金是很难做到的。
胶体金的产生过程包括晶核生成和晶核生长。加入还原剂后的短时间内，溶液中的金原子含量直线上升并达到过饱和状态。这时金原子开始生成由11个原子构成的中央二十面体晶核。为减少溶液中过饱和的金原子，晶核构架形成得非常块。一旦晶核形成，溶液中剩余的金原子依据能量递减梯度继续结合到晶核上。
图9-1: 胶体金的产生过程示意图 影响胶体金质量的因素主要包括：反应物的浓度、反应物搅拌混匀程度、反应物加料顺序、反应温度和反应器的材料。其中反应物搅拌混匀因素是最让人头疼，也是至关重要的一个因素。因为溶液中的金原子在很短的时间内被还原生成，并且很快的形成晶核，所以如果不能在很短的时间内将加入的还原剂混合均匀，很容易会得到不均一的胶体金溶液。这个问题在大批量生产中尤为突出。 n 为何使用胶体金? 胶体金悬浮于溶液中，带有部分金属的特性，会被溶液中负价离子包围；举抗体为例，抗体极容易因为带电性与胶体金结合，形成稳定的结合物。以胶体金标定的抗体，因为金原子的特性，其敏感度、稳定度、专一性与再现性都较染剂标定为高。也由于胶体金具有如此优越的特性，在1980年代晚期开始应用在需要高专一性及稳定度的快速诊断试剂上。派坤生产的快速诊断试剂即运用胶体金做高专一性的免疫呈色。 n 如何选择好的胶体金?
图9-2: 好的红色胶体金和不好的紫色胶体金 虽然60nm胶体金颗粒可以应用于快速诊断分析，但实际上很少应用于快速诊断分析。60nm胶体金颗粒与40nm胶体金颗粒的颜色稍微不同。优质的40nm胶体金为鲜红色，而60nm胶体金为深粉红色。如上图所示，品质优良的胶体金溶液会绽放出樱桃红色，且胶体金原子各个呈现圆球形；劣质胶体金溶液则是紫黑、紫红色，而胶体金原子呈现不规则的形状。
派坤自制的胶体金颗粒大小一般为20nm和40nm，可适用于免疫标定、分子检测及生物芯片等实验，可结合在DNA、抗原及抗体等蛋白质上做呈色之用。
.......................................................................................................................................................................................... n 胶体金标记代制服务 蛋白标记胶体金的实验方法很简单，只需将两种溶液混合在一起，既简单又容易。但是蛋白结合到胶体金上的化学和物理过程是很微妙的，如果不清楚其中的过程，很可能会造成金标结合物不稳定，容易结块，导致最后的产品出现稳定性和特异性的问题。 蛋白是被动地结合到胶体金上，是一个物理过程。这整个过程中主要有三种作用力起作用。（1）静电作用：金颗粒的最外层是带负电荷的，会和蛋白的正电荷区结合，因而使蛋白结合到胶体金表面上；（2）疏水作用：金颗粒除了带负电荷，它本身还是疏水性胶体，因而蛋白还能通过疏水作用和胶体金结合；（3）金硫键：金和蛋白中的硫共用电子对，能产生很强的作用力。 由于蛋白和胶体金之间主要由上述三种作用力维持，因而在金标的缓冲液中避免加入会破坏这些作用力的物质，比如避免使用高盐缓冲液、表面活性剂和含有巯基或汞的防腐剂等。胶体金标记抗体时，不能有过量的待标记抗体存在。因为过量的游离的抗体会跟胶体金上的抗体与抗原发生竞争反应，导致出现假阴性，而且过量的抗体蛋白还会影响到金标的稳定性。蛋白质和胶体金结合的最佳条件在蛋白质的等电点附近或略高于等电点。这样蛋白的净电荷为0或偏负，从而避免了因静电作用而引起聚集。 一旦蛋白结合上胶体金，必须使用BSA、凝胶、聚乙二醇或酪蛋白稳定金标溶液。这些稳定剂不仅能封闭胶体金表面未和蛋白结合的位点而减少了非特异性反应，还能提供一种更稳定的悬浮液。 派坤生物可提供胶体金结合蛋白(抗原、抗体等）的胶体金标记代制服务。可根据您的要求对抗体、抗原或半抗原偶联物进行胶体金标记，并帮助您建立标记工艺条件优化的试验模式。
图9-4: 胶体金标记抗体用于免疫层析实验的原理 其他标记服务还包括辣根过氧化物酶（HRP），荧光素（FTIC）及生物素（Biotin）等，一般是以共价键和离子键的方式连接到抗体或抗原蛋白分子上，制备成高度灵敏和特异性的分子探针，可用于 临床诊断学、医学病理学、免疫组织化学、分子生物学、生物制药与兽医药研究等领域的分析研究与技术测定。 如需要进一步信息，随时欢迎致电派坤生物，我们将很乐意为您服务。 .......................................................................................................................................................................................... 单克隆抗体及抗原（胶体金法筛选）：派坤生物提供的配对单克隆抗体和抗原试剂均使用胶体金标记方法进行过相应的诊断试剂功能性质量鉴定。以下试剂可以进行大批量的供货，以便保证您产品质量的均一性和稳定性。 1. 胶体金法食品安全检测配对抗原/抗体
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盐酸克伦特罗（瘦肉精）合成抗原（点膜） (Clenbuterol
BSA conjugant )
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莱克多巴胺合成抗原
（点膜）(Ractopamine BSA conjugant)
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氯霉素合成抗原（点膜） (Chloramphenicol
BSA conjugant)
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呋喃西林合成抗原（点膜） (Furacilinum
BSA conjugant)
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链霉素合成抗原（点膜）
(Streptomycin BSA conjugant)
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沙丁胺醇合成抗原（点膜） (Salbutamol
BSA conjugant )
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磺胺对甲氧嘧啶合成抗原 (Sulfamethoxydiazine
BSA conjugant )
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四环素合成抗原（点膜）
(Tetracycline BSA conjugant)
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环丙沙星合成抗原（点膜）（Ciprofloxacin BSA conjugant）
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青霉素合成抗原（点膜） 2. 胶体金法药物滥用（毒品）检测配对抗原/抗体
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吗啡合成抗原（点膜） (Morphine
BSA conjugant)
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冰毒合成抗原（点膜）
(Methamphetamine BSA conjugant)
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四氢大麻酚合成抗原（点膜）
(Marijuana BSA conjugant)
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K粉（氯胺酮）合成抗原（点膜） (Ketamine
BSA conjugant)
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可卡因合成抗原（点膜） (Cocaine
BSA conjugant)
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苯二氮卓合成抗原（点膜）
(Benzodiazepines BSA conjugant)
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安非他命合成抗原（点膜）
(D-Amphetamine BSA conjugant)
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巴比妥合成抗原（点膜）
(Barbiturates BSA conjugant)
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三环抗抑郁药合成抗原（点膜） (Tricyclic
Antidepressant BSA conjugant)
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丁丙诺菲合成抗原（点膜） (Buprenorphine
BSA conjugant)
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摇头丸合成抗原 （MDMA BSA
conjugant） - 苯环己哌啶合成抗原 （Phencycliding BSA conjugant） 3. 胶体金法激素检测配对抗体
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α-hCG单抗（点膜）(anti-α-hCG)
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α-LH单抗（点膜） (anti-α-LH) 4. 胶体金法传染病检测配对抗原/抗体
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HBsAg单抗 (Monoclonal
Antibody to HBsAg) - 幽门螺旋杆菌抗原（HP-ag）
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间日疟抗体（标金） (Malaria LDH
Antibody)
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恶性疟抗体（标金） (Malaria HRP
Antibody）
- Chlamydia Trachomatis(Type I)
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心肌肌钙蛋白T (human cardiac
troponin T) 6. 胶体金法肿瘤标志物检测配对抗体
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抗人血红细胞(RBC)单抗（Monoclonal
Antibody to human Red Blood Cell） - 抗人甲胎蛋白单克隆抗体 (Monoclonal Antibody to human Alfa-fetoprotein) - 抗癌胚抗原单克隆抗体 (Monoclonal Antibody to human Carcinoembryonic Antigen) - NSA(人白蛋白)单抗（NSA-C1） 7. 其他抗原/抗体
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抗A单抗
- Mouse Anti-chicken IgY
- McAb-hIgG .......................................................................................................................................................................................... n 细胞融合与单克隆抗体制备
派坤生物已建立了细胞工程室、生化室，从美国引进了液相提取仪，低温高速离心机，二氧化碳孵箱，超净工作台、倒置显微镜、CO2培养箱、纯水装置、酶标仪等仪器设备。可根据客户的不同需要提供经济、快速而可靠的单克隆抗体制备的完整解决方案，本项技术服务包括： 多克隆抗体制备：派坤生物可为您提供快速、高质量和经济的多克隆抗体制备服务，并将通过严格的抗体质量评估体系成为您在科研及生产中的得力的助手。 胶体金诊断试剂研发和生产常用的多克隆抗体（主要包括：羊抗鼠IgG多抗，羊抗兔IgG多抗，羊抗人IgG多抗）可大量供货。
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羊抗鼠多抗（Goat anti Mouse
IgG）
图9-5: 单克隆抗体和多克隆抗体的制备 .......................................................................................................................................................................................... n 基因重组抗原
HIV基因工程抗原：最早在HIV抗体免疫测定中所使用的抗原为用去垢剂裂解HIV感染的细胞后所提取的病毒抗原，这样得到的抗原纯度相对较差，因此影响测定的特异性和敏感性。现在国内外用于HIV抗体检测的酶联免疫吸附试验（ELISA）和胶体金免疫层析试验均使用基因工程抗原如gp41,gp120,gp160等，大大提高了测定的特异性和敏感性。 派坤生物出品的各类基因重组抗原批间差极小，采用全自动发酵罐和全套进口柱层析设备以及真空冷冻干燥设备，可大批量供货，并具有高度的特异性、敏感性和稳定性。公司开发生产的各类基因工程重组抗原产品已经占据了中国诊断试剂抗原原料行业相当的市场并已成功打入加拿大市场。
图9-6: 天津大学-派坤生物联合实验室全自动发酵罐 目前派坤主要应用于医学免疫诊断领域的重组抗原，主要包括艾滋病、丙肝、乙肝、梅毒以及其他多种疾病的免疫诊断用基因工程抗原：
- 基因重组人表皮生长因子（EGF） - 丙型肝炎抗原(HCV)
- HIV Ⅰ-gp24
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结核杆菌(TB)east-6重组抗原 (Recombined TB east-6 antigen)
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梅毒TP62(47+15)重组抗原 (Recombined TP62(47+15) antigen)
- 基因重组HBeAg .......................................................................................................................................................................................... n 多肽抗原合成 派坤生物可以为您提供多肽抗原设计以及多肽抗原合成、多肽抗原耦联（BSA、KLH）服务。可以提供毫克至克级多肽抗原合成及纯化服务，并以具有足够竞争力的价格满足客户需求。采用国际先进的多肽固相合成仪以及 优化的Fmoc固相多肽合成技术，使用制备级HPLC对产物进行分离纯化， 使用电泳和HPLC两种手段进行多肽纯度的鉴定，具有产品纯度高、制备量大、合成步骤质量可控的特点。本公司为生产的多肽产品提供纯度分析的HPLC色谱图。
多肽抗原设计：为产生有效的抗体,第一步是设计好的抗原,此抗原可以来源于整个蛋白质的一部份:一个或几个抗原决定簇区域的序列。一旦抗原序列决定后,接下来就是设计所需合成的多肽了,设计时除了注意其序列外,同时应考虑一些产生免疫机制的问题,如:
多肽合成方法研究抗原表位：将抗原偶联胶体金也面临不同的技术难题。将常见的蛋白质抗原偶联上胶体金比较容易，但前提为结合到抗原上的胶体金对蛋白质抗原决定簇的影响小于50％。因此，免疫金和蛋白质结合方式对研发人员非常重要。此外，与胶体金颗粒偶联相关的氨基酸残基在蛋白质中适合的定位对于达到最佳的检测灵敏度非常重要。就标记抗体来说，这些氨基酸应定位于Fc区，而对于标记抗原，它们应远离抗原的反应决定簇位置。
图9-7: 抗体与胶体金结合的机理图 根据DNA序列，推导出氨基酸序列，系统地合成每一段小肽，利用抗体或抗血清来检测能起阳性反应的片段，以获得抗原决定簇。假定推导出来的氨基酸序列是ABCDEFGH......XYZ，从A开始，系统地合成6肽，即为ABCDEF，BCDEFG，CDEFGH，DEFGHI，......然后进行斑点免疫试验或免疫层析试验，能起阳性反应的片段可认为是抗原表位，根据我们的经验，以6肽合成多肽预测抗原决定簇精确度最高。 .......................................................................................................................................................................................... n 小分子半抗原偶联 目前，小分子免疫层析在检测毒品方面已经得到广泛的应用，并且初步应用在食品安全和激素检测上。1996年，Mika P.A.等首次应用竞争免疫层析检测牛奶中的孕酮以来，研究小分子胶体金免疫层析的文章日益增多。随着小分子胶体金免疫层析的优点被人们逐渐了解，潜在的优势逐渐被挖掘，它还将会进入更加广泛的领域。但是胶体金竞争免疫层析的低灵敏度和不能定量的不足，使得它的应用受到很大的影响。因此灵敏度的提高和定量的实现，将是胶体金竞争免疫层析实行广泛应用的关键，也是将来研究的重点。 用竞争法检测小分子中，因小分子物质不能直接和胶体金结合，所以只能先将小分子或类似物偶联在大分子蛋白质上，如BSA、OVA等，然后才能让胶体金标记上。一般说来，蛋白分子中可以用于交联的活性基团有游离氨基、游离羧基、苯基、酚基、巯基、羟基、咪唑基、吲哚基或胍基等。其中用的最多的是游离的氨基，氯霉素和BSA的偶联就是通过戊二醛将氯霉素上的氨基和BSA上氨基连接。但是绝大多数的小分子都没有直接和BSA连接的基团，这就需要先在小分子上连接一个－COOH或－NH2，再和蛋白偶联。为了避免蛋白质变性及其生物活性的损失，半抗原等与蛋白的交联应采用具有中等反应活性的试剂，在温和的条件(如接近中性的pH、室温、水溶液中)进行。 半抗原偶联物与抗体的匹配：小分子竞争法检测中，免疫原（或半抗原偶联物）合成中所有的蛋白质连接技术都可以根据不同的半抗原 分子结构，标记物或载体蛋白选择，按照客户的具体要求进行，也可以通过修改其强度，位置和链接程度使其与现有的国内外抗体相匹配。 我们同样可以通过胶体金标记抗体以及半抗原偶联物固定NC膜的方法进行两者的快速匹配实验，该项目的收费根据您不同的要求而定，请向本公司查询具体报价。 .......................................................................................................................................................................................... n 生物试剂纯化及鉴定 派坤生物在抗体等蛋白质的纯化方面具有极强的设备和人员优势，可为检测所需的单克隆抗体，多克隆抗体和抗原结合剂进行纯化。通过对客户进行深入咨询，我们针对您的实际运用情况，帮助您开发出能达到理想纯度，产量和成本的最好方法。
图9-8: 天津大学-派坤生物联合实验室制备级反相-HPLC 所有的试剂在投入使用前都通过我公司的功能鉴定和标准的质量鉴定。无论是成品销售还是半成品销售,我们从原材料开始就进行严格的质量检验和质量控制。为保证您的产成品的一致性，我们可以提供大批量的试剂。
图9-9: 天津大学-派坤生物联合实验室分析型反相-HPLC 值得一提的是，天津大学-派坤生物联合实验室率先在国内引进了库仑阵列电化学液相色谱仪，ESA库仑阵列电化学检测器是目前唯一可用于梯度HPLC的电化学检测器，并可提供梯度基线修正；使用范围大，不必进行荧光检测时的必须性衍生；可以穿过通道的信号比估算峰纯度；自动量程修正增强控制能力；ESA582型泵的控制可选择梯度和非梯度配置；提供三维图谱（时间、电势和浓度曲线）等优点。
图9-10: 天津大学-派坤生物联合实验室电化学库仑阵列检测器-HPLC 该仪器在对复杂生物样品及痕量样品定性定量分析方面有着独特的优势，并且应用极其广泛，检测范围包括：天然产物分析、中药现代化研究，指纹图谱的建立；药物代谢分析、抗氧化物分析，神经递质分析等；癌症、心血管疾病、成神经细胞瘤、阿尔茨海默症等疾病的早期诊断；食品、饮料、农业等的产品质量和原材料控制；环境荷尔蒙，农药残留等环境污染物的检测。该仪器的引进以及成功的应用于瘦肉精、沙丁胺醇、四环素等胶体金免疫层析试剂盒的定量对照研发过程，标志着天津大学-派坤生物联合实验室在仪器定量检测和胶体金免疫层析试剂盒的产品研发方面已达到国际先进水平。 |
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